зелен флуоресцентен протеин (gfp) е вид биолуминесцентен протеин, открит в коелентерати. gfp е лесна за откриване, висока чувствителност, стабилни флуоресцентни свойства, силна толерантност, лесна за експресия, без цитотоксичност, използвана за откриване на живи клетки. Следователно, gfp може да бъде използван като репортерен ген за откриване на генна експресия или регулиране или като лепенка за слепване за откриване на локализация, миграция, промяна на конформацията и междумолекулно взаимодействие на протеинова молекула или целенасочен маркер на някои органели. максималният пик на абсорбционния спектър на gfp е 395 nm (uv) и с 470 nm абсолютен пик на абсорбция (син лъч). максималният пик на емисионния спектър е 509nm (зелен лъч) и 540nm страничен пик (shouder). 450nm-490nm е само вторият абсорбционен пик на gfp, но тъй като възбуждащата светлина прави по-малко увреждане на клетките, групата обикновено се използва по-често (главно 488nm). в допълнение, характеристиките на спектъра на gfp са подобни на флуоресцеин изотиоцианат (fitc), и двамата обикновено имат набор от филтри. gfp флуоресценцията е изключително стабилна. под възбуждащата светлина, способността на фото-избелването при gfp е по-силна от флуоресцеина. по-специално, тя е по-стабилна при синята лъчева вълна от 450 nm-490 nm. По подобен начин чувствителността на флуоресценцията на gfp слетия протеин е по-висока от флуоресцентното антитяло на флуорохромното белязване, е силно анти-леко избелващо действие, което е по-подходящо за количествено определяне и анализ. генерирането на gfp флуоресценция не се нуждае от никакъв екзогенен реакционен субстрат. следователно, gfp като широко прилаган жив репортерен протеин, неговият ефект е несравним с всеки друг ензимен репортерен протеин. обаче, gfp не е ензим. флуоресцентният сигнал няма ензимен амплификационен ефект. така че чувствителността на gfp може да е по-ниска от другия ензимен репортерен протеин, като например луцифераза на светулка.

начините за наблюдение на gfp:

1.преносим gfp възбуждащ светлинен източник

използването на портативен източник на светлина за възбуждане на gfp е най-удобният и най-бърз метод за наблюдение (наречено огледало за наблюдение на флуоресцентни протеини). тъй като gfp има по-висок абсорбционен пик при 470 nm, използвайки 470 nm източник на възбуждаща светлина, може да стимулира gfp да излъчва ярко зелена флуоресценция. ние трябва да носим професионално стъкло за наблюдение, за да наблюдаваме ясния флуоресцентен сигнал, когато наблюдаваме gfp флуоресценция , причината е, че възбуждащата светлина е интензивна синя светлина.

2.uv светлинен източник

използвайки UV светлинен източник (наречен UV лампа , лампа с черна светлина) също е много удобно. но ако наблюдавате растението, листното зелено на растителната зеленина също флуоресцира под ултравиолетова светлина. тя ще се намеси gfp флуоресценция , освен това пробите могат също да причинят увреждане на пробите от gfp под UV светлина.

3.Флуоресцентен микроскоп

флуоресцентен микроскоп се основава на UV като източник на светлина, се използва за облъчване на открития обект, прави го флуоресцира, след това наблюдава формата и мястото на обекта под микроскоп. флуоресцентен микроскоп се използва за изследване на абсорбцията на вътреклетъчни вещества, транспорта, разпределението и местоположението на химичните вещества. някои вещества в клетката, като листно зелено, могат да флуоресцират след облъчване с ултравиолетова светлина. други вещества не флуоресцират сами по себе си, но ако ги оцветявате с флуоресцентно багрило или флуоресцентно антитяло, може да флуоресцира и с ултравиолетова светлина. флуоресцентен микроскоп е един от инструментите за качествено и количествено изследване на такива вещества. Понастоящем популярният метод използва наблюдение на флуоресцентен микроскоп. флуоресцентен микроскоп е много популярен в лабораторията. но единственият недостатък е, че парчетата листа или животните трябва да бъдат събрани за наблюдение, което ще унищожи култивираните екземпляри и не може да наблюдава жизненост.

подробен анализ, той е най-бързият и удобен метод за наблюдаване на gfp чрез възприемане на портативен източник на светлина за възбуждане gfp (наречен трансгенно биологично космосване).